روش های تعیین مقدار آنتی بادی
تعيين مقدار آنتي بادي در نمونه مورد بررسي با رقيق كردن نمونه سرمي بدست مي آيد. بالاترین غلظتی از سرم که در آن واکنش آنتی ژن/آنتی بادی ایجاد می شود را به عنوان تیتر آنتی بادی در نظر می گیریم. بنابراین اگر بالاترین غلظتی که واکنش را ایجاد می کند 1/32 باشد سپس تیتر 1/32 خواهد بود. که معکوس آن یعنی 32 نشان می دهد که سرم رقیق نشده حاوی 32 بار آنتی بادی برای عکس العمل است
حیوانات دارای آنتی بادی قابل تشخیص، سرم مثبت هستند. حیوانات بدون آنتی بادی های قابل تشخیص، سرم منفی هستند. حیوانات که قبلا سرم منفی بوده اند و الان سرم مثبت هستند را تغییریافته سرمی می گوییم . با این حال، اغلب طبقه بندی یک حیوان به عنوان سرم مثبت بر این اساس می باشد که تیتر آنتی بادی بالاتر از حد مرزی باشد. برای مثال حیوانات با تیتر بالای 1/32 به عنوان مثبت تلقی شوند و حیوانات با تیتر کمتر و یا مساوی 1/32 منفی تلقی گردند
تغییر شکل لگاریتمی تیترها
نمونه های سرمی اغلب در سری های هندسی، یعنی با یک نسبت ثابت بین رقت های متوالی، رقیق سازی می شوند. معمول ترین نسبتی که بر اساس آن رقیق سازی انجام می شود 2 است. بنابراین نمونه های سرمی بصورت 1/2 و 1/4 و 1/8 و ... رقیق سازی می شوند. این امر پیشنهاد می کند که تیترها را باید به مقیاس لگاریتمی تغییر دهیم. دو دلیل برای این امر وجود دارد:
1.توزیع فراوانی تیترها اغلب تقریبا lognormal است. در حالی که تست های آماری که مورد استفاده قرار می گیرند، با فرض نرمال بودن کار می کنند
2.سری های رقت های هندسی به طور مساوی بر پایه یک مقیاس لگاریتمی قرار گرفته اند. مثلا سرم ممکن است به طور هندسی 1/2 و 1/4 و 1/8 و 1/16 و ... رقیق سازی شده باشد. متناظر با تغییر شکل لگاریتمی بر پایه 2، لگاریتم مربوطه بر پایه 2 معکوس رقت ها، 1 و 2 و 3 و 4 و ... می شود. رقت ها می تواند به عنوان ارزش این لگاریتم ها بر پایه 2، کددهی شوند (جدول)
در برخی موارد، غلظت بالای سرم که غیر اخصاصی عمل می کند، رقت سازی اولیه، بر پایه لگاریتم 10 القا می شود و سپس رقت سازی بر پایه لگاریتم 2 ادامه پیدا می کند. بنابراین رقت ها بصورت 1/10 و 1/20 و 1/40 و ... خواهند بود
جدول:
|
تیتر کددهی شده (لگاریتم بر پایه 2)
|
معکوس تیتر
|
|
0
|
1
|
|
1
|
2
|
|
2
|
4
|
|
3
|
8
|
|
4
|
16
|
|
5
|
32
|
|
6
|
64
|
میانگین تیترها:
اگر چندین تیتر کدگذاری شده، گزارش شده باشند، میانگین حسابی آن ها می تواند محاسبه شود. که بطور ساده جمع تیترهای کدگذاری شده تقسیم بر تعدداد تیترها می باشد . برای مثال اگر پنج تیتر 1/2 و 1/2 و 1/4 و 1/4 و 1/8 را داشته باشیم، تیترهای کدگذاری شده بصورت 1 و 1 و 2 و 2 و 3 می باشد. که میانگین حسابی آن ها 1.8 خواهد بود
میانگین هندسی تیترها آنتی لگاریتم پایه 2 میانگین حسابی است. برای مثال اگر میانگین حسابی چندین تیتر کدگذاری شده 1.8 باشد، سپس میانگین هنندسی برابر خواهد بود با 1.82
اگر بطور اولیه یک رقیق سازی بر پایه لگاریتم 10 انجام شده باشد، و سپس با لگاریتم 2 رقیق سازی ادامه پیدا کرده باشد، ارزش قبل از این که لگاریتم ها بر پایه 2 گرفته شوند، تقسیم بر 10 می شود. برای مثال رقت های 1/10 و 1/20 و 1/40 و 1/80 و ... که بصورت 0 و 1 و 2 و 3 ... کد گذاری خواهند شد، میانگین حسابی آن ها 1.5 خواهد بود. حال میانگین هندسی تقسیم بر 10 برابر خواهد بود با . پس میانگین هندسی برابر است با 10* 1.52
لگاریتم صفر نمی تواند بیان شود. بنابراین زمانی که میانگین تیترهای کدگذاری شده را محاسبه می کنیم حیوانات سرم منفی محروم خواهند شد چون تیترهای معکوس آن ها صفر هستند و بنابراین نمی توانند کدگذاری شوند. در نتیجه میانگین تیترها فقط برای حیوانات سرم مثبت محاسبه می شوند. بنابراین زمانی که تیترهای آنتی بادی کدگذاری شده در جمعیت را مقایسه می کنیم دو پارامتر قبل از این که استنباط صورت گیرد باید مورد توجه قرار گیرند: نسبت حیوانات سرم مثبت (بدون در نظر گرفتن تیتر) و میانگین هندسی تیتر جمعیت سرم مثبت. برای مثال ممکن است که دو جمعیت گاو شیری مشخص شوند که تقریبا 20 درصد گاوها در هر گله با لپتوسپیرا سرووار پومونا، سرم مثبت بوده اند، اما میانگین هندسی در یک گله 40 در حالی که در گله دیگر 640 می باشد. این چنین وضعیت هایی ممکن است یک اپیدمی تازه را در گله دوم و فقط بقای آنتی بادی در حیوانات به گرا در گله اولی را نشان دهند. از طرف دیگر، ممکن است در بررسی سرولوژیکی کارگران دو کشتارگاه مختلف، میانگین هندسی آنتی بادی های بر علیه کوکسیلا بورنتی در هر دو گروه کارگران سرم مثبت مشابه باشد اما در یک کشتارگاه 30 درصد از کارگران سرم مثبت بوده اند، در حالی که در دیگر کارگران فقط 3 درصد سرم مثبت بودند. این چنین نتایجی یک احتمال عفونت بسیار بزرگتری را در گشتارگاه اول نشان می دهد، اگرچه میانگین هندسی تیترها در هر دو گروه مشابه بود .
نظرات شما عزیزان:
آمار
وب سایت:
